Leucina aminopeptidasa

La leucina aminopeptidasa (LAP) es una enzima proteolítica que hidroliza de manera no exclusiva pero sí preferentemente, la unión peptídica próxima a un residuo de leucina amino-terminal. Esta enzima forma parte de un grupo generalizado de enzimas, aminopeptidasas, que se encargan de degradar el residuo N-terminal de los péptidos volviéndolos más pequeños, por lo que dentro de la clasificación de estas enzimas la LAP se caracteriza por la eficacia relativa que tiene para eliminar dichos residuos de leucina. (Taylor, 1993)

Reacción

Esta enzima cataliza velozmente la hidrolisis de los péptidos que tienen leucina en su estructura de acuerdo con la siguiente reacción:

Figura 7 Reacción que cataliza LAP.

LAP elimina eficazmente leucina y otros residuos hidrofóbicos. La velocidad de formación de L-leucina será proporcional a la concentración catalítica de LAP en la muestra ensayada. (Holguín et. al., 2017)

Localización 

LAP es una enzima citosólica que se encuentra distribuida ampliamente en tejido hepático, pulmón, estómago, riñón, intestino, cerebro, suero y leucocitos. 

Al ser una enzima citosólica hepática se le considera marcador de ruptura celular hepática aunque es de poca especificidad diagnostica.

Significado clínico

LAP ha sido asociada con tumor de células proliferativas, invasión o angiogénesis. Su significado clínico y función biológica en el carcinoma hepatocelular aún no está esclarecido. la expresión de esta enzima se encuentra significantemente elevada en carcinoma hepatocelular y que ello puede contribuir a la proliferación y metástasis del cáncer. 

Podemos encontrar niveles elevados de LAP en niños con ictericia causada por daño hepático, en hepatitis viral, cirrosis, neoplasias hepáticas, pancreatitis y obstrucción hepática. Niveles altos se han encontrado en sueros de pacientes con hepatitis crónica y cirrosis, por otro lado, niveles ligeramente elevados se encontraron en enfermedades obstructivas hepáticas.

Puede ser determinada en pacientes con carcinoma hepatocelular en combinación con el marcador tumoral alfafetoproteína para mejorar la sensibilidad y disminuir los posibles falsos negativos. 

Valores de referencia

Determinación a 25ºC:

Hombres:  8 - 22 U/L

Mujeres: 0.6 - 4.7 U/L

Determinación a 30ºC:

Hombres:  12 - 33 U/L

Mujeres: 0.9 - 7 U/L

Determinación a 37ºC:

Hombres:  20 - 55 U/L

Mujeres: 1.5 - 11 U/L

El embarazo aumenta los niveles de LAP. (SPINREACT, 2004)

Significado de resultados anormales

• Colestasis
• Cicatrización y funcionamiento deficiente del hígado por cirrosis
• Hepatitis
• Cáncer de hígado
• Isquemia hepática
• Necrosis hepática
• Tumor hepático
• Uso de drogas hepatotóxicas

Bibliografías 

• Taylor, A. (1993). Aminopeptidases: Structure and function. FASEB Journal: Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology, 7(2), 290-298. https://doi.org/10.1096/fasebj.7.2.8440407
• Holguín Macías, D. J., & Flores Alvia, A. E. (2017). LEUCINA AMINOPEPTIDASA Y SU RELACIÓN CON LA FUNCIÓN HEPÁTICA EN COMERCIANTES DE MARISCOS, ASOCIACIÓN 18 DE AGOSTO-JIPIJAPA. Universidad Estatal del Sur de Manabí.
• Ramíres, M., Prieto, I., Martínez, J., Ramírez, M., Martínez, A., Hermoso, F., & Alba, F. (1997). Aminopeptidasas séricas humanas. Una hipótesis de trabajo. Seminario Médico, 15-26.
• SPINREACT. (2004).Determinación cuantitativa de Leucina aminopeptidasa (LAP). Obtenido de https://www.cromakit.es/pdfs/inserts/1001250.pdf

 

Bilirrubina

El metabolismo de la bilirrubina comienza con la degradación de los glóbulos rojos (GR) en el sistema reticuloendotelial (en particular en el bazo). La hemoglobina se libera de los GR y se degrada para formar las moléculas "hem" y "globina". El grupo hem se cataboliza a continuación para formar biliverdina (gracias a la acción enzimática de la hemo-oxigenasa), la cual se transforma en bilirrubina no conjugada (o indirecta) mediante la acción de la biliverdina reductasa. En el hígado, la bilirrubina indirecta se conjuga con una molécula de glucurónido y se forma la bilirrubina conjugada (directa). (Pagana, 2015)
La bilirrubina conjugada es excretada al intestino por medio de la bilis. Gracias a la flora  intestinal, la bilirrubina conjugada es transformada en dos compuestos que se van a eliminar, el urobilinógeno (se transforma en urobilina para eliminarse en orina, que otorga la pigmentación de la orina) y estercobilina (heces, que da pigmentación a las heces). (Pagana, 2015)

Origen de la prueba

Debido a que el ojo humano es capaz de detectar el color amarillento de la bilirrubina, las concentraciones plasmáticas de este compuesto se han estimado durante varios siglos. Por ejemplo, en 1883, Ehrlich describió por primera vez una reacción en muestras de orina de la formación de un pigmento rojo o azul cuando la bilirrubina se acopló con una solución de ácido sulfanílico diazotizado, mientras que Malloy y Evelyn desarrollaron la primera técnica cuantitativa útil para la bilirrubina en 1937, mediante la aceleración de la reacción con una solución a 50% de metanol. (Bishop, 2006)

Valores de Referencia

• Bilirrubina Conjugada (BD): 0-0.2 mg/dl
• Bilirrubina no conjugada (BI): 0.2-0.8 mg/dl 
• Bilirrubina Total (BT): 0.2-1.0 mg/dl (Bishop, 2006)

Hiperbilirrubinemia, generalidades

En general, los aumentos de BI se observa en hemólisis, deficiencia de UDP glucoronil-transferasa; los aumentos de BD se observan en obstrucción de vías biliares y en disfunción de la parénquima hepática mientras que la elevación mixta es frecuente y su interpretación depende de cada fracción y del contexto clínico. (Pagana, 2015)

Causas de hiperbilirrubinemia directa. (Pagana, 2015)

• Litiasis biliar
• Obstrucción del conducto extrahepático (causados por tumor, inflamación, cálculo biliar, desgarramiento, traumatismo quirúrgico)
• Metástasis hepática extensa
• Colestasis por fármacos (supresión de la excreción de bilis por el hepatocito)
• Síndrome de Dubin-Johnson
• Síndrome de Rotor 

Causas de la hiperbilirrubinemia indirecta. (Pagana, 2015)

• Eritroblastosis fetal.
• Reacción a la transfusión.
• Anemia de células falciformes.
• Ictericia hemolítica.
• Anemia hemolítica.
• Anemia perniciosa.
• Resolución de hematoma grande.
• Hepatitis.
• Cirrosis.
• Sepsis.
• Síndrome de crigler-Najjar.
• Síndrome de Gilbert.
• Hiperbilirrubinemia neonatal.

Bibliografía

• Bishop, M. (2006). Química clínica: principios, procedimientos y correlaciones (Quinta ed.). D.F., México: Mc Graw-Hill. 
• Pagana, K. & Pagana, T. (2015) Laboratorio Clínico: Indicaciones e interpretación de resultados (Quinta ed). D.F., México: El Manual Moderno.

Pruebas de medición de la capacidad sintética del hígado

La medición de los productos finales de la actividad sintética hepática puede usarse para evaluar la patología hepática. Aunque estas pruebas no son sensibles a un daño hepático mínimo, resultan útil para cuantificar la gravedad de la disfunción hepática. (Bishop, 2006)

La albúmina y la globulina representan la mayor parte de la proteína dentro del cuerpo y se determinan juntas como proteína total. La albúmina es una proteína que se forma dentro del hígado. Conforma casi el 60% del total de la proteína. Su efecto principal dentro de la sangre consiste en mantener la presión coloidal osmótica. Aún más importante, la albúmina transporta componentes esenciales como fármacos, hormonas y enzimas. (Pagana, 2015)

Las globulinas representan todas las proteínas distintas de la albúmina. Su papel en el mantenimiento de la presión osmótica es mucho menor que el de la albúmina. Las α-globulinas corresponden sobre todo a la α1-antitripsina. Algunas transportan proteínas, como la globulina tiroidea y la globulina unida a cortisol. Las α2-globulinas incluyen haptoglobinas séricas, ceruloplasmina, protombina y colinesterasa. Las β1-globulinas comprenden a las lipoproteínas, transferrina, plasminógeno y proteínas complementarías; las β2-globulinas incluyen al fibrinógeno. Las gammaglobulinas son inmunoglobulinas. En un grado menor, las globulinas también actúan como vehículos de transporte. (Pagana, 2015)

Las proteínas en el análisis clínico

En algunas enfermedades disminuye de manera selectiva la albúmina; las globulinas se hallan en límites normales o incrementados para mantener una cifra normal de proteínas totales. Por ejemplo, en las afecciones vasculares del colágeno se incrementa la permeabilidad capilar. La albúmina, que por lo general es más pequeña que las globulinas, se pierde de manera selectiva dentro del espacio extravascular. Otro grupo de padecimientos relacionados de modo similar con albúmina disminuida, globulina elevada y proteínas totales normales son las enfermedades crónicas hepáticas. En estos trastornos, el hígado no puede sintetizar albúmina, pero se elabora globulina de manera adecuada en el sistema reticuloendotelial. En ambos tipos de enfermedades la cifra de albúmina es baja, aunque la cantidad de proteínas totales es normal por las concentraciones aumentadas de globulina. No obstante, estos cambios se pueden detectar midiendo la relación albúmina/globulina. En condiciones normales, esta tasa es mayor de 1.0. Las enfermedades descritas que modifican de modo selectivo los valores de albúmina se relacionan con tasas más bajas. (Pagana, 2015)

Valores de referencia

Adultos/ancianos

• Proteína total: 6.0 a 8.3 g/dl
• Albúmina: 3.4 a 5.4 g/dl 
• Globulina: 2.3 a 3.4 g/dl
• α1-globulinas: 0.1 a 0.3 g/dl
• α2-globulinas: 0.6 a 1 g/dl
• β-globulinas: 0.7 a 1.1 g/dl

Niños

Proteína total

• Lactante prematuro: 4.2 a 7.6 g/dl
• Recién nacido: 4.6 a 7.4 g/dl
• Lactante: 6 a 6.7 g/dl
• Niño: 6.2 a 8 g/dl

Albúmina

• Lactante prematuro: 3 a 4.2 g/dl
• Recién nacido: 3.5 a 5.4 g/dl
• Lactante: 4.4 a 5.4 g/dl
• Niño: 4 a 5.9 g/dl

Resultados de la prueba y significado clínico

Concentraciones aumentadas de albúmina

• Deshidratación

Concentraciones disminuidas de albúmina

• Desnutrición
• Embarazo
• Enfermedad hepática
• Enteropatías perdedoras de proteína
• Nefropatías perdedoras de proteína
• Pérdidas a tercer espacio
• Sobrehidratación
• Permeabilidad capilar aumentada
• Enfermedad inflamatoria
• Disproteinemia familiar idiopática

Concentraciones aumentadas de α1-globulinas

• Enfermedad inflamatoria

Concentraciones disminuidas de α1-globulinas

• Enfisema pulmonar juvenil

Concentraciones elevadas de α2-globulinas

• Enfermedad inflamatoria

Concentraciones disminuidas de α1-globulinas

• Hemólisis
• Enfermedad de Wilson
• Insuficiencia hepática grave

Concentraciones aumentadas de β-globulinas

• Hipercolesterolemia
• Anemia por deficiencia de hierro
• Tratamiento con estrógenos

Concentraciones disminuidas de β-globulinas

• Desnutrición
• Coagulopatía por consumo

Concentraciones aumentadas de gammaglobulina

• Mieloma múltiple
• Macroglobulinemia de Waldenström
• Enfermedad crónica inflamatoria
• Neoplasias
• Hiperinmunización
• Cirrosis
• Infecciones aguda y crónica
• Enfermedad de cadena ligera

Concetraciones disminuidas de gammaglobulina

• Enfermedad genética inmunitaria
• Deficiencia inmunitaria secundaria

Concentraciones aumentadas de inmunoglobulinas monoclonales sanguíneas

• Mieloma múltiple
• Macroglobulinemia de Waldenström

Aumento de inmunoglobulinas policlonales sanguíneas

• Amiloidosis
• Enfermedades autoinmunitarias
• Infecciones crónicas o inflamación
• Enfermedad hepática crónica

Inmunoglobulinas monoclonales urinarias aumentadas

• Mieloma múltiple
• Macroglobulinemia de Waldesntröm

Bibliografía

• Bishop, M. (2006). Química clínica: principios, procedimientos y correlaciones (Quinta ed.). D.F., México: Mc Graw-Hill. 
• Pagana, K. & Pagana, T. (2015) Laboratorio Clínico: Indicaciones e interpretación de resultados (Quinta ed). D.F., México: El Manual Moderno.

Lactato deshidrogenasa (LDH)

La lactato deshidrogenasa es una enzima importante que participa en el metabolismo anaerobio de la glucosa para la generación de ATP. Esta enzima cataliza la transformación de lactato en piruvato. Utiliza la coenzima NAD+. (Bishop, 2006)

Figura 6. Reacción catalizada por LDH

(Bishop, 2006)

La LDH se encuentra distribuida de manera extensa en el cuerpo. Principalmente, se localiza en el corazón, hígado, músculo esquelético y riñón. También se puede encontrar en cantidades menores en los pulmones, músculo liso y cerebro. (Henry, 2005)

Isoenzimas de la LDH

La LDH es un tetrámero formado por subunidades H (corazón) y M (músculo). Tiene cinco isoenzimas:

Isoenzima	Subunidades	Localización
LDH1	HHHH	·       Corazón ·       Eritrocitos
LDH2	CCCM	·       Corazón ·       Pulmón ·       Sistema reticuloendotelial
LDH3	CCMM	·       Pulmón
LDH4	CMMM	·       Riñón ·       Páncreas ·       Placenta
LDH5	MMMM	·       Hígado ·       Músculo esquelético

Tabla 1. Isoenzimas de LDH

(Pagana, 2015)

LDH en el análisis clínico

Las concentraciones altas de esta enzima puede presentarse en enfermedades cardiacas, hepáticas, del músculo esquelético y renales. En los trastornos hepáticos, como la hepatitis y la cirrosis, se muestran ligeros aumentos de dos a tres veces el LSN (límite superior de la normalidad). Por su amplia distribución en los tejidos, un valor alto de LDH total es muy inespecífico. Por lo tanto, se toma el valor de una de sus isoenzimas.  La enzima se puede separar en cinco fracciones y cada una contiene cuatro subunidades. Tiene un peso molecular de 128,000 daltons. Cada cadena polipeptídica tiene un peso molecular de 32,000 daltons. (Bishop, 2006)

Cuando una lesión afecta a las células que contienen LDH, las células se lisan y la enzima se libera hacia la circulación sanguínea. Un aumento de la isoenzima LDH5 señala un daño o enfermedad hepatocelular, ya que esta isoenzima es la que se localiza en el hígado. Las concentraciones de LDH5 tienen mayor importancia clínica en la detección de trastornos hepáticos, particularmente, trastornos intrahepáticos. Se ha identificado la isoenzima LDH6, que es una deshidrogenasa de alcohol. La LDH5 se incrementa al mismo tiempo con la aparición de LDH6, por lo que probablemente represente una congestión hepática debido a una enfermedad cardiovascular. Se sugiere que la LDH6 puede reflejar una lesión hepática secundaria a insuficiencia circulatoria grave. (Bishop, 2006)

Resultados anormales

Concentraciones altas:

LDH1 y LDH2

• Infarto de miocardio
• Anemia hemolítica
• Anemia megaloblástica
• Infarto renal agudo

LDH3

• Embolismo pulmonar
• Neumonía pulmonar extensa
• Linfocitosis
• Pancreatitis aguda
• Carcinoma

LDH4 y LDH5

• Lesión hepática o inflamación
• Lesión del músculo esquelético

Valores de referencia

LDH total

• Recién nacidos: 160-450 U/L
• Lactantes: 100-250 U/L
• Niños: 60-170 U/L a 30 °C
• Adultos/ancianos: 100-190 U/L a 37 °C

Isoenzimas

Adultos/ancianos:

• LDH1: 17-27%
• LDH2: 27-37%
• LDH3: 18-25%
• LDH4: 3-8%
• LDH5: 0-5%

(Pagana, 2015)

Bibliografía

• Bishop, M. (2006). Química Clínica: principio, procedimientos y correlaciones (Quinta ed.). D.F., México: McGraw-Hill
• Pagana, K. & Pagana, T. (2015) Laboratorio Clínico: Indicaciones e interpretación de resultados (Quinta ed.) D.F., México: El Manual Moderno
• Henry, J. B. (2005) Henry. El Laboratorio en el Diagnóstico Clínico. Edición Homenaje a Todd-Sandford & Davidsohn. México: Marble